26 марта 2016г.
В настоящее время изучено около 400 болезнетворных микрогрибов – возбудителей зарегистрированных случаев микозов у человека и животных[1, 2]. Сегодня список болезнетворных микрогрибов пополняется, в среднем, на 10 видов в год. Возбудителей поверхностных кератомикозов и дерматомикозов в России классифицируют по группам патогенности (I-IV) и относят к IV группе - оппортунистические инфекции, за рубежом применяют критерий уровней биологической защиты «BSL-biological safety levels», характеризующих возбудителей по степени риска при контакте с ним и относят возбудителей данных поверхностных микозов ко второму уровню BSL [ 6, 8, 9, 10].
При этом, условно-патогенные микробы, представители резидентной и транзиторной микрофлоры макроорганизма, оказывают болезнетворное воздействие на организм при увеличении их численности на фоне нарушения симбионтных отношений в результате снижения резистентности организма животных [2, 3]. В это время транзиторные патогенные микробы активно проникают во внутреннюю среду макроорганизма и занимают освободившееся место в еѐ микробиоценозе [4, 5].
В связи с этим, впервые в условиях Самарской области исследовали бродячих и домашних собак – с признаками кератомикозов, проводивших большое количество времени на природе и имеющих активный ежедневный моцион.
Цель исследований – микробиологическая диагностика поверхностных кератомикозов у собак. Исходя из цели исследований были поставлены следующие задачи – выделение чистой культуры микрогрибов, изучение морфологических и культуральных свойств микрогрибов.
Материал и методы исследований. Объектом исследований были 40 бродячих и домашних собак в возрасте двух-трѐх лет, сформированных в две группы. Бродячие собаки (первая группа) были отловлены с помощью кормовых приманок, из них были отобраны по средней живой массе 10 кобелей и 10 сук, которых содержали в разных вальерах. Домашние собаки – таксы (вторая группа) наблюдались в ветклиниках г.Самара. Животные имели свободный доступ к воде и трѐхразовое в сутки кормление специализированными кормами, сбалансированными по энергии и питательным веществам. Материал для исследования отбирали из кожных поражений, путѐм соскоба обушком скальпеля. Поражѐнное место обрабатывали предварительно тампоном, смоченным 70% раствором спирта для предотвращения загрязнения материала посторонней бактериальной микрофлорой. Соскоб проводили с выделяющегося наружного края поражения, поскольку здесь высока возможность содержания жизнеспособных микрогрибов. При соскобе удаляли поверхностные легко отделяемые чешуйки. Материал помещали в микропробирки, доставляли в ветклиники и на кафедру «Эпизоотология, патология и фармакология» Самарской ГСХА. Первую часть материала – чешуйки и волосы помещали на предметное стекло и добавляли 20% раствор щѐлочи КОН, просветление материала позволяет растворить кератин и остатки клеток эпидермиса, оставляя неповреждѐнными клетки и споры микрогрибов. Препараты накрывали покровным стеклом, слегка надавливая, отжимали излишнюю жидкость и подсушивали. Через 10 мин проводили первичную микоскопию. Вторую часть материала - кусочки волос и чешуйки кожи использовали для подготовки микосуспензии с последующим посевом на среды. Из материала готовили микосуспензию методом 10-кратных разведений. Микосуспензию высевали на селективно-элективные среды по десять чашек Петри на каждую пробу. Микосуспензию из соскобов засевали в чашки Петри на глюкозо-пептон-дрожжевой агар, содержащий твин-80 и липидные наполнители, с тетрациклином (100 ЕД/мл). Культуры культивировали от 4 до 10 дней при 30оС [7].
Выросшие колонии идентифицировали по культуральным и морфологическим свойствам при вторичной микоскопии чистых культур микрогрибов. Подсчѐт КОЕ – колониеобразующих единиц проводили на приборе ПСБ. Результаты обрабатывали статистически в компьютерной программе Excel.
Результаты исследований. В ходе первичной микоскопии препаратов из соскобов были обнаружены вегетативные и репродуктивные [2,3] структурные компоненты микрогрибов кератомицетов возбудителей поверхностных микозов (Табл.1).
Таблица 1
Результаты первичной микоскопии нативных препаратов
Материал для исследования
|
Морфотип возбудителя
|
Чешуйки кожи из соскоба
|
Палочковидные несколько изогнутые псевдогифы и округлые дрожжевые клетки дрожжеподобного микрогриба рода Malassezia
|
В результате микологического исследования на селективно-элективных средах выросли характерные для кератомицетов колонии (Табл.2).
Таблица 2
Результаты микологического исследования
Колонии микрогрибов/
питательная среда
|
Бродячие собаки
|
Домашние собаки
|
Культуральные свойства
|
КОЕ/мл
|
КОЕ/мл
|
Кератомицеты
|
5,72х106±0,48
|
3,12х103±0,72
|
Зифироподобные с войлочной
|
рода Malassezia/
|
выделены у
|
выделены у
|
структурой, шероховатой
|
глюкозо-пептонный-
|
100%
|
65%
|
поверхностью, выпуклым центром и
|
дрожжевой агар
|
исследованных
|
исследованных
|
неровной периферией бело-жѐлтые
|
животных
|
животных
|
колонии Malassezia spp 5-6 мм в
|
диаметре, аромат и изменения цвета
|
среды вокруг колоний отсутствовали.
|
В результате вторичной микоскопии чистой культуры микрогрибов рода Malassezia были найдены палочковидные, незначительно изогнутые псевдогифы, округлые и овальные дрожжевые клетки со следами почкования на одном из полюсов материнской клетки. Это дрожжеподобные микрогрибы Malassezia furfur и globosa. Микрогрибы рода Malassezia являются возбудителя оппортунистических малоконтагиозных инфекций, проявляющих пик активности в летний период года. Наибольшая плотность колонизации микрогрибами Malassezia у теплокровных животных и человека выявляются в наиболее богатых сальными железами участках кожи, где они и были обнаружены у исследованных животных.
Заключение. Проблема кератомикозов у мелких животных актуальна, поскольку их возбудители выделяются у более чем 60-70% домашних животных. У бродячих собак кератомикозы выявлены в 100% исследованных случаях. Мелкие животные, особенно бродячие собаки, принимают активное участие в круговороте патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в окружающей среде. Они ежедневно обсеменяют объекты внешней среды. Это приводит к увеличению численности в различных микробиоценозах, в частности, дрожжеподобных микрогрибов рода Malassezia и распространению кератомикозов среди бродячих и домашних мелких животных, а также человека.
Список литературы
1. Воробьѐв А.А. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / А.А. Воробьѐв, А.С. Быков, М.Н. Бойченко [и др.]. – М. : Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 35-84.
2. Гарибова, Л.В., Лекомцева, С.Н. Основы микологии: Морфология и систематика грибов и грибоподобных организмов : учеб. пособие / Л.В. Гарибова, С.Н. Лекомцева. – М.: Товарищество научных изданий КМК, 2005. – С. 14-28.
3. Джессика С.С. Микробы хорошие и плохие. Наше здоровье и выживание в мире микробов / С.С. Джессика.– М. : АСТ, 2012. – С. 96-125.
4. Ермаков В.В. Резидентная и транзиторная микрофлора бродячих кошек и собак в условиях Самарской области. / В.В. Ермаков // Известия Самарской ГСХА. – 2013. – №1. – С. 15-19.
5. Ермаков В.В., Медведева А.Р., Черкасова А.П. Микрофлора бродячих кошек и собак в условиях Самарской области. Достижения науки агропромышленному комплексу: сборник научных трудов. – Самара : РИЦ СГСХА, 2014. – С. 210-213.
6. Кэрол А. Кауфман, Джеральда Л. Манделла Атлас грибковых заболеваний / Кауфман А. Кэрол, Манделла Л. Джеральда [и др.]. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. – С. 6-201.
7. Лабинская А.С. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований / А.С. Лабинская, Л.П. Блинкова, А.С. Ещина [и др.]. – М. : Медицина, 2007. – С. 57-575.
8. Сергеев, А.Ю., Сергеев Ю.В. Грибковые инфекции : монография / А.Ю. Сергеев, Ю.В. Сергеев. – М. : ООО Бином-пресс, 2008. – С. 30-132, 143-193.
9. Кератомикозы кошек и собак [Электронный ресурс]. URL: http://donetskdog.3bb.ru/viewtopic.php?id=308 (дата обращения 07.02.15)
10. Дерматомикозы мелких домашних животных [Электронный ресурс]. URL: http://vestfalding.ucoz.ru/forum/2-716-1 (дата обращения 23.01.15)