20 мая 2017г.
Хронический гепатит С (ХГС) является одним из наиболее распространенных инфекционных заболеваний человека, характеризуясь выраженными иммунологическими сдвигам, высокой частотой развития цирроза и первичного рака печени [6, 10]. Обладая, как известно, гепатотропным действием, вирус гепатита С (HCV) способен, тем не менее, персистировать и в клетках костного мозга, что способствует их ускоренному апоптозу, снижению пролиферативной активности и развитию цитопенического синдрома системы крови (СК) [7]. Вышеуказанные изменения у лиц, страдающих ХГС, вполне возможно, могут иметь определяющее значение и в развитии гематологических осложнений при проведении противовирусной терапии (ПВТ) хронической HCV-инфекции [2, 4].
На кафедре инфекционных болезней РостГМУ выполнена научная работа, направленная на разработку эффективных мер предупреждения ПВТ-ассоциированных анемии, нейтро- и тромбоцитопении у больных ХГС [8, 9]. При этом одним из ключевых моментов исследования явилось использование модифицированной аутогемотерапии, заключающейся во внутривенном введении пациентам гемолизата аутокрови (ГАК). Дело в том, что еще в 70-х годах ХХ столетия сотрудниками ЦНИИ гематологии и переливания крови Минздрава СССР было доказано, что внутривенное введения гемолизата сопровождается неизменным повышением гемопоэтической активности сыворотки крови [5]. Однако механизм действия этого феномена до настоящего времени малоизучен. Получив и в нашей работе вполне убедительные данные клинической эффективности ГАК, нас, конечно же, заинтересовал патогенетический аспект его гемопоэтической активности.
Цель работы – на основе детального изучения у больных ХГС белкового спектра плазмы крови, установить возможные механизмы стимулирующего эффекта ГАК.
Материалы и методы. У 37 больных ХГС, получавших ГАК, была выполнена непрямая MALD- TOF-масс-спектрометрия плазмы крови. Исследование проводилась непосредственно перед назначением аутогемотерапии и спустя 10 дней ежедневного внутривенного введения 20,0 мл ГАК.
Селективное выделение фракции белков из плазмы крови выполняли с помощью магнитных гранул, входящих в набор реактивов Profiling Kit MB-IMAC Cu (Bruker Daltonics, Германия). В качестве матрицы для выделенных белков использовали α-циано-4-гидроксикоричную кислоту (Sigma, США). Работа проводилась на аппарате масс-спектрометре Autoflex II MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Германия). Для получения и анализа масс-спектров использовали программы FlexControl версии 2,4 (Bruker Daltonics, Германия) и FlexAnalysis версии 2,4 (Bruker Daltonics, Германия). Для идентификации белков использовали программу BioTools версии 3.0 (Bruker Daltonics, Германия) [1, 3].
Результаты исследования. В ходе протеомного анализа плазмы крови у наблюдавшихся пациентов было выделено более 300 белков. Воспользовавшись единой международной базой данных полипептидных последовательностей – UniProt (http://www.uniprot.org/), мы сочли возможным все выявленные молекулярные профили дифференцировать в следующие функциональные группы:
1. Белки, регулирующие процессы кроветворения.
2. Белки, участвующие в воспалительных реакциях организма, обеспечивающие антигенспецифический и антигеннеспецифический иммунный ответ, а также белки, обладающие антимикробной активностью.
3. Белки, выполняющие роль специфических рецепторов (R) поверхностной мембраны форменных элементов крови.
4. Белки-участники реакций внутриклеточного метаболизма.
5. Белки-транскрипционные факторы, регулирующие активность ядра и митотическое деление клетки.
6. Белки свертывающей и антисвертывающей систем крови.
7. Транспортные белки плазмы крови.
8. Белки, регулирующие процессы свободно-радикального окисления, детоксикации и элиминации.
9. Белки, регулирующие ангиогенез, активность рецепторных структур эндотелия и тонус сосудов.
10. Белки, обладающие системным действием, либо реализующие свои основные биологические эффекты в различных органах и тканях.
11. Белки, функция которых пока не изучена.
Учитывая приоритетное направление работы, было вполне естественным, что среди всего многообразия обнаруженных белковых последовательностей нас, прежде всего, интересовали те, которые могут оказывать регулирующее воздействие на процессы кроветворения. В связи с этим мы изучили частоту встречаемости ИЛ-1β, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-9, ИЛ-10, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-14, ЕРО, эритроферрона, G-CSF, GМ-CSF, THРО, ФНО-α, C-C motif chemokine-21 и Rhombotin-2, выделенных в плазме крови наблюдавшихся пациентов непосредственно перед проведением аутогемотерапии и спустя 10 дней ежедневного внутривенного введения 20,0 мл ГАК.
Проведенный статистический анализ показал, что в результате внутривенного введения в течение 10 дней 20,0 мл ГАК частота встречаемости в плазме крови больных ХГС ИЛ-1β, ИЛ-3, ИЛ-6, ИЛ-9, ИЛ-11 и эритроферрона достоверно повысилась, а ИЛ-10 и ИЛ-13, наоборот, существенно снизилась (во всех случаях р<0,05). Удельный же вес пациентов, с выделенными в плазме крови ИЛ-7, ЕРО, G-CSF, GМ-CSF и THРО, имел при этом статистически незначимую тенденцию к повышению, а ИЛ-4, ФНО-α, C-C motif chemokine- 21 и Rhombotin-2 – к снижению своего уровня (во всех случаях р>0,05).
Заключение. Полученные данные свидетельствуют, на наш взгляд, о том, что под действием биологически активных фрагментов Hb, образующихся в результате гемолиза, происходят существенные изменения протеомного профиля плазмы крови в сторону преобладания белков, оказывающих стимулирующее влияние на гемопоэз. Выявленные сдвиги, по всей вероятности, и обусловливают клиническую эффективность ГАК у больных ХГС, получающих аутогемотерапию.
Список литературы
1. Амбалов Ю.М., Васильева И.И., Рязанова О.А., Исламова И.И., Лисаева Л.Э., Донцов Д.В., Кузнецова Г.В. Клинико-патогенетические особенности простого герпеса в разные периоды болезни // Эпидемиологияиинфекционныеболезни. – 2009. – №3. – С. 22-26.
2. Амбалов Ю.М., Донцов Д.В., Мамедова Н.И. Современные представления о проблеме гематологических осложнений комбинированной противовирусной терапии хронического гепатита С // Современныепроблемынаукииобразования. – 2014. – № 5. – С. 502.
3. Амбалов Ю.М., Дубина Н.В., Донцов Д.В. и др. Роль комбинированной противовирусной терапии в патогенезе нарушений функционального состояния сердечно-сосудистой системы у больных хроническим гепатитом С // Кубанский научный медицинский вестник. – 2012. – № 2. – С. 14-19.
4. Донцов Д.В., Амбалов Ю.М. Способ прогноза интерферон-рибавирининдуцированной нейтропении у больных хроническим гепатитом С // Кубанский научный медицинский вестник.– 2011. – № 3. – С. 67-69.
5. Донцов Д.В., Амбалов Ю.М., Алексеева Н.Н. Роль изменений ряда показателей функционального состояния сердечно-сосудистой системы в клинике и патогенезе хронического гепатита С // Фундаментальныеисследования. – 2012. – №2-2. – С. 290-293.
6. Донцов Д.В., Амбалов Ю.М., Васильева В.В. Оценка степени активности хронического гепатита С // Современныепроблемынаукииобразования. – 2011. – №6. – С. 6.
7. Донцов Д.В., Амбалов Ю.М., Мамедова Н.И. Изменения иммунологических показателей при развитии гематологических осложнений у больных хроническим гепатитом С, получающих комбинированную противовирусную терапию // Современныепроблемынаукииобразования. – 2014. – №6. – С. 981.
8. Донцов Д.В., Амбалов Ю.М., Мамедова Н.И. Нейтропения у больных хроническим гепатитом С, получающих комбинированную противовирусную терапию. Клинические проявления. Особенностипатогенеза// Современныепроблемынаукииобразования. – 2014. – №5. – С. 479.
9. Донцов Д.В., Амбалов Ю.М., Пройдаков М.А. и др. Тромбоцитопения убольных хроническим гепатитом С, получающих комбинированную противовирусную терапию. Клинические проявления. Особенности патогенеза // Фундаментальные исследования. – 2014. – №10-1. – С. 59-63.
10. Донцов Д.В., Романова Е.Б., Амбалов Ю.М. Метод альтернативного анализа Вальда как способ прогноза прогрессирования заболевания у больных хроническим гепатитом С // Кубанский научный медицинский вестник. – 2011. – № 4. – С. 69-72.
