10 июня 2017г.
В период с 2014 по 2016 годы исследовали резистентность у полевых изолятов эймерий кур, выделенных из различных птицехозяйств Российской Федерации, к никарбазину и комбинированным антикокцидийным препаратам. Резистентность полевых изолятов определяли по противококцидийному индексу (ПКИ). Частичная резистентность к никарбазину установлена у двух из восьми исследованных изолятов. К монензину+никарбазину частичную резистентность показал один изолят из трёх исследованных. К наразину+никарбазину частичная резистентность установлена у четырёх изолятов из семи.
Ключевые слова: комбинированные препараты, никарбазин, наразин, монензин, цыплята-бройлеры
В современных условиях ни одно птицеводческое хозяйство не обходится без антикокцидийных препаратов. Широкое их применение способствовало появлению устойчивых форм эймерий. Развитие резистентности у паразита сводит на нет эффективность проводимых профилактических мероприятий.
Для лечения и профилактики эймериоза кур разработаны комбинированные препараты, в состав которых входят субтерапевтические дозы кокцидиостатика и ионофорного антибиотика. Механизм действия их основан на синергизме веществ различной химической структуры. Примерами таких препаратов являются: комбинация никарбазина и наразина, известная под торговой маркой Максибан G; никарбазина и монензина, торговая марка Монимакс. Синергическая комбинация моногликозидного полиэфирного ионофорного антибиотика мадурамицина и никарбазина для применения против эймериоза домашней птицы указана в патенте EP 0182117 A1 [6]. Эффективность комбинации семдурамицина с никарбазином в отношении E. tenella показана в патенте US 5283249 A [7].
В открытых источниках мало информации по развитию резистентности у полевых и лабораторных культур эймерий к комбинированным антикокцидийным препаратам. Так в работе K. W. Bafundo и T. K. Jeffers после отбора в одинаковых условиях показана полная резистентность штамм E. acervulina и частичная устойчивость штамма Е . ten ella к комбинации монензина и никарбазина [3].
Проведён ряд исследований по оценке чувствительности 26 полевых изолятов к никарбазину и к комбинации наразина с никарбазином. Результаты этих исследований показали, что 81 % изолятов эймерий кур были чувствительны к действию никарбазина и только 22 % к комбинации наразина с никарбазином [4].
Цель работы - изучить распространение резистентности у полевых изолятов эймерий кур, циркулирующих в различных птицехозяйствах Российской Федерации, к никарбазину и комбинированным антикокцидийным препаратам.
Материалы и методы
Культура эймерий
Из биологического материала (помёт) от кур из различных птицехозяйств РФ выделяли, очищали и размножали культуры эймерий по общепринятым методикам. Эймерии типировали по морфологическим признакам ооцист, продолжительности препатентного периода и патоморфологическим изменениям в кишечнике у цыплят-бройлеров после контрольного заражения.
Выделенные и очищенные спорулированные ооцисты в растворе 2,0 % калия двухромовокислого хранили при температуре (2-4) °С.
Экспериментальные животные
Исследования чувствительности эймерий к никарбазину и комбинированным антикокцидийным препаратам проводили на цыплятах-бройлерах в возрасте четырнадцати суток. Птица получена из хозяйства, благополучного по инфекционным и инвазионным болезням. Кормление и содержание цыплят- бройлеров в условиях вивария соответствовало возрасту.
Антикокцидийные препараты
Исследовали никарбазин (НИК) и комбинированные антикокцидийные препараты: монензин+никарбазин (МОН+НИК) и наразин+никарбазин (НАР+НИК).
Постановка эксперимента
Разделение птицы на группы проводили по принципу аналогов: на две контрольные и опытные группы по шесть голов в каждой. Первая группа – интактные животные; вторая – контроль заражения, остальные - опытные группы. Цыплят заражали выделенной культурой эймерий в дозе ЛД50.
Предварительно корм смешивали с никарбазином и комбинированными антикокцидийными препаратами в дозах, рекомендованных в инструкции по применению, и за сутки до заражения задавали цыплятам-бройлерам.
Наблюдение за цыплятами-бройлерами вели в течение 10 дней после заражения. В начале и в конце опыта птицу взвешивали, определяли средний вес одной головы, учитывали летальность, клинические проявления эймериоза и результаты патологоанатомического вскрытия павшей птицы.
Оценка чувствительности эймерий
Оценку антикокцидийной активности изучаемых препаратов проводим по методике М. В. Крылова [1], используя данные по летальности цыплят и приросту живой массы тела по группам.
При противококцидийном индексе менее 120 баллов и более 20 % гибели цыплят в опытной группе у возбудителя сформировалась резистентность к препарату. При ПКИ от 120 до 160 баллов и гибели цыплят в опытной группе до 20 % у возбудителя имеется частичная резистентность к препарату. При ПКИ от 160 до 200 баллов и отсутствии гибели птицы в опытной группе у возбудителя нет признаков устойчивости к препарату.
Результаты
Исследовали материал из восьми птицехозяйств РФ. В четырёх случаях выделяли культуру E. acervulina, в двух – смесь культур E. acervulina и E. tenella, в двух - E. acervulina, E. tenella и E. maxima.
Заражающая доза для цыплят-бройлеров культурой E. acervulina составляла 2,200 млн. спорулированных ооцист; смеси E. acervulina и E. tenella – 2,000 млн. (E. acervulina) и 0,100 млн. (E. tenella); смеси E. acervulina, E. tenella и E. maxima – 2,000 млн. (E. acervulina), 0,100 млн. (E. tenella) и 0,100 млн. (E. maxima).
Результаты определения ПКИ исследованных препаратов в отношении полевых изолятов эймерий кур представлены в таблице 1.
Таблица 1 – Результаты определения ПКИ препаратов в отношении полевых изолятов эймерий кур, выделенных от птицы из различных птицехозяйств РФ
Изолят
|
Вид эймерий
|
ПКИ, балл
|
НИК
|
МОН+НИК
|
НАР+НИК
|
1
|
Acv + ten +max
|
155
|
-
|
129
|
2
|
Acv + ten +max
|
146
|
131
|
141
|
3
|
Acv + ten
|
184
|
-
|
167
|
4
|
Acv + ten
|
189
|
184
|
-
|
5
|
Acv
|
170
|
-
|
145
|
6
|
Acv
|
164
|
179
|
157
|
7
|
Acv
|
178
|
-
|
160
|
8
|
Acv
|
168
|
-
|
160
|
Примечание: НИК – никарбазин; МОН+НИК – монензин+никарбазин; НАР+НИК – наразин+никарбазин; Acv - E. acervulina; ten - E. tenella, max - E. maxima.
Из полученных результатов видно, что ПКИ колебался от 129 баллов у изолята 1 (смесь: E. acervulina, E. tenella и E. maxima) к наразину+никарбазину до 189 баллов у изолята 4 (смесь: E. acervulina и E. tenella) к никарбазину.
Степень резистентности полевых изолятов эймерий представлена в таблице 2.
Из данных таблицы 2 видно, что из восьми исследованных изолятов частичная резистентность к никарбазину установлена у двух, состоявших из смеси видов E. acervulina, E. tenella и E. maxima. Из трёх изолятов эймерий частичная резистентность к монензину+никарбазину установлена у одного изолята (смесь: E. acervulina, E. tenella и E. maxima). К наразину+никарбазину частичная резистентность определена у четырёх изолятов, представленных смесью видов и E. acervulina, из семи исследованных.
Таблица 2 – Степень резистентности полевых изолятов эймерий кур к никарбазину и комбинированным антикокцидийным препаратам
Изолят
|
ПКИ, балл
|
НИК
|
МОН+НИК
|
НАР+НИК
|
1
|
ЧР
|
-
|
ЧР
|
2
|
ЧР
|
ЧР
|
ЧР
|
3
|
Ч
|
-
|
Ч
|
4
|
Ч
|
Ч
|
-
|
5
|
Ч
|
-
|
ЧР
|
6
|
Ч
|
Ч
|
ЧР
|
7
|
Ч
|
-
|
Ч
|
8
|
Ч
|
-
|
Ч
|
Примечание: Ч – чувствительность, ЧР – частичная резистентность.
Обсуждение
Изложенные в работе данные по чувствительности полевых изолятов эймерий кур к никарбазину и комбинированным антикокцидийным препаратам согласуются с результатами исследований, проведёнными K. W. Bafundo с соавторами в США [4].
Большинство, а именно 75 %, исследованных полевых изолятов кур, представленных E. acervulina и смесью видов E. acervulina и E. tenella, показали чувствительность к никарбазину. Чувствительность к наразину+никарбазину показали только 43 % полевых изолятов, представленных также моновидовой и дивидовой культурами эймерий. Чувствительность полевых изолятов эймерий к монензину+никарбазину требует дополнительного изучения.
Чувствительность выделенных культур эймерий к никарбазину можно объяснить снижением частоты применения данного химического препарата в хозяйствах, поскольку он имеет ограничения в жаркий период года. Высокий процент резистентности у изолятов эймерий к комбинированным антикокцидийным препаратам связан с широким распространением ионофорных антибиотиков, к которым у паразита выработалась устойчивость.
Снижение чувствительности полевых изолятов эймерий к наразину+никарбазину вызывает беспокойство, поскольку это может повлиять на эффективность применения салиномицина, перекрестная резистентность которого с наразином описана в ряде работ [2, 5].
Список литературы
1. Крылов, М. В. Оценка кокцидиостатических свойств препаратов / М. В. Крылов // Ветеринария.— 1969. — № 10. — С. 48-51.
2. Augustine, P. C. Effect of Ionophorous Anticoccidials on Invasion and Development of Eimeria: Comparison of Sensitive and Resistant Isolates and Correlation with Drug Uptake / P. C. Augustine,C. K. Smith, H. D. Danforth, M. D. Ruff // Poultry Sci. – 1987. – V. 66. – P. 960-965.
3. Bafundo, K. W., Jeffers, T. K. Selection for resistance to monensin, nicarbazin, and the monensin plus nicarbazin combination / K. W. Bafundo, T. K. Jeffers // Poultry Sci. – 1990. – V. 69. – P. 1485-1490.
4. Bafundo, K. W., Cervantes, H. M., and Mathis, G. F. Sensitivity of Eimeria Field Isolates in the United States: Responses of nicarbazin-containing anticoccidials/ K. W. Bafundo, H. M. Cervantes, G. F. Mathis // Poultry Sci. – 2008. – V. 87. – P. 1760-1767.
5. Chapman, H. D. Field isolates of E. tenella: Sensitivity to diclazuril, maduramicin, narasin, salinomycin and a mixture of nicarbazin/narasin / H. D. Chapman // in Coccidia and Intestinal Coccidiomorphs. Proceedings of the Vth International Coccidiosis Conference, Tours, France. / Institut National de la Recherche Agronomique. – Paris, 1989. – P. 323–326.
6. Anticoccidial compostions: патент 0182117 EP: МПК А23К1/18, А61Р33/02, А23К1/16, А61К31/17, А61К31/505 / Sidney Kantor; заявитель и патентообладатель American Cyanamid Company. – № EP19850113315; заявл. 21.10.1985; опубл. 28.05.1986.
7. Anticoccidial combinations comprising nicarbazin and semduramicin: патент 5283249 US: МПК A01N43/16, A01N43/54 / Jesse E. Shively; заявитель и патентообладатель Pfizer Inc. – № US07/986,178; заявл. 07.12.1992; опубл. 01.02.1994.