26 марта 2016г.
В данной статье приводятся экспериментальные данные по изучению влияния на организм лабораторных животных природных иммуномодулирующих препаратов: арабиногалактана, спиртовой настойки кордицепса, ветеринарного препарата траметин. Исследовали жизнеспособность лабораторных животных, привитых внутрибрюшинно суспензией клеток асцитной карциномы Эрлиха. В исследовании оценивалась выживаемость животных, результаты гематологических исследований. В дальнейшем планируется изучение влияния комплексной терапии с использованием иммуномодулирующих и химиотерапевтических препаратов.
Ключевые слова: асцитная карцинома Эрлиха, внутрибрюшинно, иммуномодуляторы, арабиногалктан, траметин, кордицепс.
В представленной работе проводилось изучение лекарственных препаратов, которые обладают иммуномодулирующими свойствами – траметина, арабиногалактана, спиртовой настойки кордицепса. Объектом исследования являлась перевиваемая опухоль асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ).
Цель работы состояла в изучении влияния данных препаратов на выживаемость лабораторных животных.
Методика эксперимента. В качестве экспериментальных животных использовали беспородных белых мышей-самцов массой 25 – 30 г в возрасте 2 – 3 мес., выращенных во ФГУЗ «Иркутский противочумный научно- исследовательский институт» Роспотребнадзора и содержавшихся в стандартных условиях вивария. Объектом исследования являлись клетки АКЭ, пролиферирующей в перитонеальной полости мышей-самцов.
Все исследования были выполнены в соответствии с этическими требованиями по работе с экспериментальными животными, изложенными в следующих нормативно-правовых документах: «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приложение к приказу МЗ СССР №775 от 12.08.1977 г.); Хельсинская декларация всемирной медицинской ассоциации, 2000 г.; «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005) «Правила лабораторной практики» (приложение к приказу МЗ РФ №708н от 23.08.2010 г.).
АКЭ прививали в брюшную полость мыши в дозе 0,2 мл суспензии [2]. После прививки всех испытуемых мышей разделили на 5 групп по принципу аналогов, в каждой группе было по 6 мышей: I – Контрольная – интактные мыши; II – Контрольная – привита АКЭ (без лечения); III – Экспериментальная – привита АКЭ (лечение «Траметином»); IV – Экспериментальная – привита АКЭ (лечение «Арабиногалактаном»); V – Экспериментальная – привита АКЭ (лечение «Кордицепсом»).
Введение препаратов лабораторным животным после прививки опухоли начинали через 6 дней. Дозировки препаратов были выбраны в соответствии с наставлениями для препаратов. Соответственно, дозировка на одну мышь составила: АГ – 1 мл, настойки кордицепса и раствора траметина – по 0,6 мл. Препараты выпаивали перорально с помощью зонда в течение 14 дней, проводили клиническое наблюдение, оценивали продолжительность жизни мышей.
В процессе эксперимента проводилось ежедневное наблюдение за мышами, а именно: за их активностью, общим состоянием здоровья, аппетитом, выживаемостью. Для исследования проводили забор крови у животных наблюдаемых групп через 8 дней после начала лечения. Для получения крови у мышей кончик хвоста опускали в тѐплую воду, затем обсушивали марлей и срезали кончик хвоста. После взятия крови рану на хвосте прижигали спиртовым раствором йода [4]. Гематологический анализ крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе «Mindrey 5300» (Китай) с использованием реагентов той же фирмы.
Среднеарифметическую величину находили в соответствии с методическим руководством Р.Б. Стрелкова[1].
Результаты исследования. Учѐт гибели животных проводили в течение всего эксперимента. Эффективность препарата оценивали по его влиянию на продолжительность жизни животных. Изменения некоторых гематологических показателей крови представлены в Табл.1.
Таблица 1
Результаты гематологических исследований
|
Показатели
|
Группы
|
|
Норма
|
I
(интактные)
|
II
(заражѐнные)
|
III
(Траметин)
|
IV (АГ)
|
V
(Кордицепс)
|
|
Лейкоциты (WBC), 109/л
|
7.5±0.3
|
16.36±6,08
|
7.84±6.75
|
15.56±11.48
|
57.4±8.4
|
8.5±8.2
|
|
Нейтрофилы (Neu), %
|
5 – 40
|
9.71±4.33
|
5.76±5.12
|
12.06±10.38
|
41.48±2.24
|
6.2±5.3
|
|
Лимфоциты (Lym), %
|
30 – 90
|
6.3±1.7
|
1.45±0.89
|
2.82±1.03
|
6.75±1.92
|
1.59±1.38
|
|
Моноциты (Mon), %
|
0 – 10
|
0.21±0.14
|
0.02±0.01
|
0.3±0.2
|
0.02±0.01
|
0.02±0.02
|
|
Эозинофилы (Eos), %
|
0 – 5
|
0.09±0.02
|
0.47±0.32
|
0.36±0.13
|
9.01±8.62
|
0.73±0.63
|
|
Базофилы (Bas),
%
|
0 – 1
|
0.09±0.05
|
0.015±0.004
|
0.03±0.03
|
0.15±0.08
|
0.01±0.01
|
|
Эритроциты (RBC), 1012/л
|
7.7±12.5
|
8.39±0.24
|
1.78±1.71
|
7.84±0.45
|
6.05±0.64
|
1.54±1.47
|
|
Гемоглобин (HGB), г/л
|
10 – 20
|
139±4.14
|
32.3±30.8
|
133.6±6.7
|
108±12.07
|
26±24.89
|
|
Гематокрит (HCT), %
|
35 – 45
|
58.6±2.3
|
11.1±10.6
|
51.46±5.25
|
49.3±2.5
|
11.8±11.4
|
|
Тромбоциты (PLT), 109/л
|
–
|
1273.8±172.1
|
249±238.05
|
1218±165.55
|
977±546.5
|
302.5±289.3
|
В таблице приведены показатели нормы крови лабораторных мышей [5]. По результатам гематологического анализа можно заключить, что в I-ой группе (интактная) показатели крови находятся в пределах нормы. В III-ой и IV-ой группе наблюдается воспалительный процесс, т.к. содержание лейкоцитов является повышенным – 15.56-57.4х109/л. Содержание гемоглобина понижено в IV-й и V-ой группах. Настойка кордицепса оказывает значительный лечебный эффект, который проявляется в ослаблении воспалительного процесса. С другой стороны, при введении настойки кордицепса в экспериментальной группе животных отмечается резкое снижение содержания эритроцитов и гемоглобина.
Нами был проведѐн расчѐт средней продолжительности жизни лабораторных животных по методике Першина Г.Н. [3]. Согласно выбранной методике, животных фиксировали, определяли срок гибели каждого животного. После гибели всех животных рассчитывали среднюю продолжительность их жизни в контрольной и опытной группах по формуле (%):
где, а – средняя продолжительность жизни мышей в леченой группе, б – средняя продолжительность жизни мышей в контроле.
Средняя продолжительность в группах составила, %: Траметин (III) – 3,7; АГ (IV) – 9,1; Кордицепс (V) – 5,3. По результатам расчѐта установлено, что лучшая выживаемость отмечается в группе IV.
По результатам работы можно сделать следующие выводы: по гематологическим исследованиям очевидно, что наиболее слабый лечебный эффект оказывает настойка кордицепса (V); в группе АГ (IV) наблюдали наиболее высокое содержание лейкоцитов, по сравнению с другими группами, что свидетельствует о сильном воспалительном процессе в организме животных (57.4±8.4х109/л); в группе с траметином (III) было отмечено повышение содержания эритроцитов (7.84±0.45×1012/л) и гемоглобина (133.6±6.77 г/л), а также гематокрита и тромбоцитов в крови, по сравнению с другими группами.
Заключение.
Из испытанных нами иммуномодулирующих препаратов в дальнейших экспериментальных исследованиях для разработки эффективной схемы комплексного лечения АКЭ при комплексной терапии могут быть использованы препараты траметин и арабиногалактан, наряду с химиотерапевтическими препаратами.
Список литературы
1. Жаков И.С. Методические указания к методу вычисления среднеквадратической ошибки и доверительных интервалов средних арифметических величин с помощью таблицы Р.Б. Стрелкова / И.С. Жаков, В.М. Жаков // Витебск. – 1986. – С. 4 – 6.
2. Инжеваткин Е.В. Практикум по экспериментальной онкологии на примере асцитной карциномы Эрлиха: Метод. разработка / Сост. Е.В. Инжеваткин. Краснояр. гос. ун-т – Красноярск, 2004. – С. 10.
3. Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии (практическое руководство) / под ред. Г.Н. Першина // издание второе, Изд-во Медицина, Москва. – 1971. – С. 367.
4. Степанов Ю.М. Лабораторные методы диагностики. Исследование крови. Учебно-методическое пособие / Сост. Ю.М. Степанов. Хакасский филиал ФГОУ ВПО «КрасГАУ». – Абакан, 2004. – С. 55.
5. Murphy J.C. Hematologic and serum protein reference values of Octodon degus / J.C. Murphy, S.M. Niemi, K.M. Hewes and etc. // Source American journal of veterinary research, 39:4, 1978, Apr. – pg. 713 – 5. [Электронный ресурс] – http://degu.by/viewtopic.php?f=10&t=354 (дата обращения 26.04.2015 г.).
