Курако У.М.

В настоящее время кампилобактер рассматривается как ведущая причина бактериального гастроэнтерита у населения во всем мире. Существует растущий спрос на обнаружение кампилобактера в пищевых продуктах для соблюдения новых правил его контроля в продукции птицеводства. Большинство видов Campylobacter относительно метаболически неактивны, что затрудняет их идентификацию на основе биохимических характеристик. Наиболее широко используемые методы для контроля пищевых продуктов при выявлении кампилобактера - это традиционные способы культивирования патогена на питательных средах. Классический метод обнаружения возбудителя включает этап предобогащения образца в течение 48 ч и последующее выделение характерных бактерий на селективном агаре. При этом результаты окончательной идентификации патогена доступны только через 4-5 дней. Оба этапа культивирования выполняются в микроаэрофильных условиях. Этапы идентификации патогена трудоемкие и длительные.

Кампилобактериоз - это острая инфекционная болезнь, вызываемая патогенными для человека видами бактерий рода Campylobacter, характеризующаяся симптомами интоксикации, преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта, а у маленьких детей и у ослабленных людей нередко протекающая в виде генерализованного (септического) процесса [9].

Возбудители кампилобактериоза широко распространены в природе. Их обнаруживают в почве, воде, выделяют из организма многих видов птиц и животных. Однако основным источником для человека являются сельскохозяйственные птицы и животные, грызуны [4].

В 108 странах мира, в том числе и в России, ВОЗ включила эту инфекцию в национальную программу по борьбе с инфекционными заболеваниями, что подтверждает значимость проблемы распространения кампилобактериоза.

Распространение бактерий рода Campylobacter осуществляется через корма, воду, подстилку, продукты животноводства. Обильная контаминация мясных туш возбудителем наблюдается в случае надреза кишечника, когда его содержимое попадает на органы и ткани туши животного.

По данным ВОЗ, кампилобактерии, являются основной причиной диарейных заболеваний у людей и, как правило, рассматривается в качестве наиболее распространенных причин бактериального гастроэнтерита по всему миру. В развитых и развивающихся стран, они вызывают больше случаев диареи, чем, например, сальмонеллы. В развивающихся странах бактерии рода Campylobacter особенно часто встречаются у детей в возрасте до двух лет, что иногда приводит к смерти. Почти во всех развитых странах, распространенность инфекций Campylobacter человека неуклонно растет на протяжении нескольких лет. Причины этого неизвестны [2].

До 90 % всех кампилобактериозных заболеваний человека вызывает вид Campylobacter jejuni (С. jejuni).

C. jejuni является причиной кишечной инфекции человека в 50 % (в 30 раз чаще, чем сальманеллы и ишерихии), при этом у 2 % этих больных проявляется реактивный артрит. Довольно часто C. jejuni является причиной синдрома Guillain-Barré – острого идиопатического полиневрита [5].

C. jejuni не переносится здоровыми людьми, зато эти бактерии часто обнаруживаются у цыплят (заражено от 20 % до 100 % цыплят) и другой домашней птицы, крупного рогатого скота, и даже у мух. Бактерии этого вида иногда обнаруживаются и в не хлорированной воде водоемов и ручьев.

Загрязнение пищевых продуктов может произойти во время убоя и переработки, когда съедобной части вступают в  контакт  с содержимым кишечника. Для возникновения  заболевания  иногда достаточно 400-500 бактерий, хотя этот показатель сильно изменяется от человека к человеку и для многих инфицирующая доза гораздо выше. Это позволяет рассматривать C. jejuni как возможный этиологический фактор профессионального заболевания у работников птицеперерабатывающих предприятий [8].

Инфицированная C. jejuni птица теряет в весе, пропадает яйценоскость, среди молодняка часто случается падеж, что в свою очередь приводит к большим затратам на ликвидационные и профилактические мероприятия на предприятии.

В нашей стране зарегистрированы единичные случаи кампилобактериоза животных и птиц на северо- западе Европейской части страны, Западной Сибири. Гораздо больше случаев заражения бактериями вида C. jejuni идут недиагностированные или незарегистрированными [1].

Зарегистрированных случаев распространения кампилобактериоза среди людей и птицы в Саратовской области, судя по литературным источникам, не обнаружено.

Классические методы определения бактерий рода Campylobacter в продуктах и биоматериале основаны на высеве определенных количеств исследуемого продукта (биоматериала) в жидкие селективные среды, содержащие антибиотики и аэротолерантные добавки с последующим пересевом на поверхность твердых селективных сред, инкубировании посевов, выявлении в этих посевах бактерий, способных расти и образовывать типичные колонии на поверхности селективного агара, с последующим выделением чистой культуры. Все этапы инкубации посевов осуществляются в микроаэрофильных условиях. Идентификация чистых культур проводится по совокупности морфологических, биохимических и других признаков, определяющих принадлежность бактерий к видам рода Campylobacter. Эти методики требуют больших аппаратных затрат и длительного времени обнаружения.

Для ускоренного обнаружения Campylobacter, сокращения трудозатрат разработаны, испытаны и широко применяются альтернативные (ускоренные) методы выявления возбудителя. Многие из этих методов официально рекомендованы в РФ и широко используются.

К альтернативным (ускоренным) методам относят ПЦР-диагностику и иммунохроматографические экспресс-тесты [7].

Ведущим направлением развития рынка ДНК-диагностики является диагностика инфекционных заболеваний. Многие инфекционные заболевания животных сопровождаются контаминацией продуктов животноводства возбудителями инфекций. Это делает целесообразным применение ПЦР с целью оценки безопасности продуктов питания для человека. Особенно это актуально для хронических и субклинических инфекций. В частности, в литературе описаны опыты успешного применения ПЦР для индикации возбудителей туберкулеза, бруцеллеза и листериоза крупного рогатого скота в молоке коров [6, 10].

Для проведения ПЦР-диагностики кампилобактериоза используют:

-   тест – системы «КАМ-БАК» для выделения и идентификации возбудителя кампилобактериоза С.jejuni методом ПЦР (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзор, АмплиСенс, Москва, Россия);

-    системы foodproof-Campylobacter (Biotecon Diagnostics GmbH Потсдам, Германия), которая позволяет проводить не только скрининг исследуемых образцов на наличие Campylobacter со среды обогащения, но и быстро (в течение 2-3 часов) идентифицировать Campylobacter с агаризованных сред.

Ускоренные методы позволяют существенно (на 24-48 ч) сократить продолжительность исследований. Обладая высокой cспецифичностью, они обеспечивают надежное выявление Campylobacter в анализируемом материале.

Иммунохроматографический анализ (ИХА) – метод, основанный на разделении частиц методом парной связки и реакции между антигеном и соответствующим ему антителом в биологических материалах (моча, слюна, цельная кровь, сыворотка или плазма крови и т.п.). Данный вид анализа проводится с помощью специальных экспресс-тестов, тест-полосок или тест-кассет.

Антиген - это вещество, которое определяется организмом человека как чужеродное и которое может запускать иммунную (защитную) реакцию.

Антитела - это белки, образующиеся клетками организма человека в ответ на внедрение в него антигена.

Одним из самых важным свойством антител является их способность избирательно связываться с антигеном. Это означает, что каждое антитело связывается только с определенным антигеном. На этой уникальной особенности антител и основаны все иммунологические методы анализа, в том числе и ИХА.

Для определения кампилобактериоза используют иммунохроматографические экспресс-тесты:

-   Singlepath®-Campylobacter (Экспресс-тест Мерк, Германия) - экспресс-тест для выявления кампилобактера в пищевых продуктах. Иммунохроматографический тест на основе меченных золотом антител. Тест представляет собой диагностическую тест-панель с круглой лункой для добавления образца, овальным окном с тестовой и контрольной зонами. Чувствительность метода - 1 клетка (КОЕ) Campylobacter spp. в 25 г образца или 104-107 бактерий в мл среды накопления

-   Singlepath Direct Campy Poultry Kit - (Экспресс-тест Мерк, Германия) - экспресс-тест для быстрого обнаружения Campylobacter в фекалиях кур (прямой метод без предобогащения), который представляет собой экспресс-тест для быстрого обнаружения Campylobacter в фекалиях кур. Набор рассчитан на 10 определений, содержит все необходимые для проведения тестирования материалы и реагенты. Тест может проводиться на месте отбора проб, так как  отсутствует этап предобогащения. Результаты теста легко учитывать. В основе определения - метод иммунохроматографического анализа. С помощью экспресс-теста Singlepath® Direct Campy Poultry Kit анализ проводится просто и быстро. Тест является альтернативой классическому методу, который занимает 48 часов, или ПЦР, требующего специального оборудования и квалификации персонала.

Методы ПЦР-диагностики и иммунохроматографические экспресс-тесты в два раза более информативны, чем классические методы, что совпадает с данными других авторов [9]. Кроме того, эти экспресс-методы позволяет провести анализ за 5 – 6 часов, тогда как по общепринятой бактериологической методике на это требуется до 2  – 3 недель. Они значительно производительнее бактериологического метода [3, 11]. ПЦР позволяет обнаружить некультивируемые микроорганизмы, значение которых в патологии животных и человека с каждым годом возрастает. Все это делает возможным рекомендовать ПЦР-диагностику и иммунохроматографические экспресс-тесты для индикации кампилобактеров в животноводческой продукции.

С помощью экспресс-методов можно быстро выявить пробы молока и мяса, содержащие возбудителей инфекций, бактериологический метод позволяет серо – биотипировать культуру, определить ее вирулентные свойства.

Все вышесказанное делает возможным рекомендовать методы ПЦР-диагностики и иммунохроматографические экспресс-тесты в качестве эффективного дополнительного экспресс – метода лабораторной диагностики бактерий рода Campylobacter и индикации их в продуктах животного происхождения.

Данная схема рекомендуется практическим ветеринарным лабораториям.

Список литературы

1.     Campylobacter Infection and Animals – Режим доступа : http://www.cdc.gov/healthypets/diseases/campylobacteriosis.htm.

2.     Campylobacter. – Режим доступа: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs255/en/.

3.     Odinot P., Meis F., Gurgs J. Two. - Step polimerase chain reaction assay for detection of Yersinia spp. in general and pathogenic Y. enterocolitica strains specifically // Int. Infect. Dis. – 1997. – V.l, №.4. – P. 206 – 211.

4.     Stern N.J. Reservoirs for Campylobacter jejuni and approaches for intervention in poultry // American Society for Microbiology. – Washington. D.C., 1992. – P. 49 – 60.

5.     Вестернблот для определения IgG/IgA антител против различных антигенов Campylobacter jejuni. – Режим доступа:   http://www.westernblot.ru/wb_cj_rus.htm.

6.     Додонов М.М. Повышение качества лабораторной диагностики туберкулеза сельскохозяйственных животных : автореф. дис… канд. биол. наук. – Саратов, 2001. – 21 с.

7.     Кампилобактер – Режим доступа : http://mibio.ru/contents.php?id=613

8.     Кирьянов Е.А. Кампилобактериоз животных: лекция // Приморский с.-х. ин-т. – Уссурийск, 1992. – 23 с.

9.     Клинико-патогенетические           аспекты           кампилобактериоза.           –           Режим            доступа           : http://www.medlinks.ru/article.php?sid=15099.

10. Красникова Е.С., Курако У.М. Применение полимеразной цепной реакции для исследования продуктов животного происхождения // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - 2011. – № 01. – С. 29 – 32.

11. Щербаков А.А., Курако У.М. Применение ПЦР для быстрого выявления Campylobacter jejuni в продуктах убоя кур // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - 2009. - № 12. - С. 47 - 49.